El virus DENV-3 es el responsable del segundo mayor porcentaje de afecciones hemorrágicas severas causadas por este virus, solo superado por el virus DENV-2. La virulencia de este serotipo, causante de brotes epidémicos a gran escala en países como Venezuela donde circula activamente durante todo el año, es la razón principal del desarrollo investigativo en el campo de las interacciones virus-vector en la búsqueda de un control epidémico efectivo. En el presente trabajo, se evaluó la expresión de dos genes, RNAi (dcr-2 y ago-2), que codifican para proteínas de respuesta antiviral en mosquitos con la finalidad de estudiar el cambio en la expresión de los mismos en el vector una vez infectado con el DENV-3. Para ello, se infectó artificialmente una población de Aedes (stegomyia) aegypti de Trujillo, elaborándose dos grupos experimentales (15dpi y 20dpi) y un control; posteriormente se aisló, cuantificó y se realizó transcripción reversa al RNA total aislado de los grupos. La infección en los grupos experimentales se evidenció por la detección de bandas de productos de PCR de 511pb para DENV y 290pb para DENV-3 mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%, y se realizó la cuantificación relativa de la expresión genética por PCR en tiempo real. Como resultado, la expresión de los genes no presentó cambios con respecto a los mosquitos no infectados (grupo control) (p<0.05). Estos resultados indican que el virus DENV-3 pudiera estar mostrando mecanismos de evasión sobre las vías de RNAi dentro del cuerpo del vector, y esto puede estar relacionado al hecho de que la replicación de los miembros del genero Flavivirus, entre ellos el DENV, se lleva a cabo en el sistema de membranas y vesículas, lo que les permite evadir el encuentro en el citoplasma con las proteínas asociadas al complejo de RNAi.

DENV-3 is the responsible for the second major percentage of hemorrhagic severe affections caused by this virus, only overcome by DENV-2. The virulence of this serotype is the cause of broad scale fever outbreaks in different countries, especially in Venezuela where it circulates actively throughout the year. This is the main reason of investigative developments in the virus-vector interactions field to find an effective epidemic control. In this study, we evaluated the expression of dcr-2 and ago-2, two RNAi antiviral pathway genes in mosquitoes to study the fold change in the expression of these genes in the mosquito vector Aedes (stegomyia) aegypti infected with DENV-3. We artificially infected a population of mosquitoes from Trujillo state (Venezuela) and prepared three (3) experimental groups (15dpi, 20dpi and a control group). Later, we isolated, quantified and applied a reverse transcription to the total RNA obtained of mosquitoes and the infection in the experimental groups was detected performing a 2% agarose gel electrophoresis of the PCR products of the total RNA (511bp for DENV and 290bp for DENV3). In addition, the infection in the experimental groups was confirmed by the detection of PCR products. The fold change in dcr-2 and ago-2 expression genes was quantify by Real Time PCR. As results, the fold change expression in the ago-2 and dcr-2 were equal to the non-infected mosquitoes “control group” (p<0.05). These results indicate that DENV-3 could have evasion mechanisms of RNAi pathway inside vector’s body, and this can be related to the fact that dengue virus replication is accomplished in the vesicle system and membrane system as well (endoplasmic reticulum and golgi complex) avoiding cytoplasmic encounter with the RNAi pathway proteins.

OBJETIVOS: Estudar a sobrevivência de populações de Aedes albopictus de ambientes rural e urbano, em diferentes condições de alimentação, e analisar sua idade fisiológica e a história reprodutiva. MÉTODOS: Foram coletadas larvas de Ae. albopictus no Vale do Paraíba (localidade urbana), e no Vale do Ribeira (localidade rural), Estado de São Paulo. As fêmeas que emergiram foram alimentadas com açúcar ou com sangue e observadas diariamente anotando a data da morte de cada uma e outras variáveis relacionadas com a reprodução. Os ovários foram dissecados seguindo a técnica de Polovodova, e a avaliação do desenvolvimento folicular segundo Christophers e Mer. Foram construídas tábuas de vida e analisadas estatísticamente as taxas de sobrevida. Para análise dos dados foi utilizado o Stata 7.0. RESULTADOS: Foi observada discordância gonotrófica nas duas populações de Ae. albopictus. As fêmeas oníparas desenvolveram sacos terminais. As nulíparas apresentaram ovários normais e em alguns casos foram observadas dilatações. As fêmeas alimentadas com açúcar apresentaram maiores taxas de sobrevida. Não foi detectada diferença estatística na taxa de sobrevida entre as duas populações avaliadas. CONCLUSÕES: A idade fisiológica e o estado de paridade de Ae. albopictus não foram definidas pela análise dos ovaríolos porque estes apresentaram sacos terminais em vez de dilatações. O tipo de alimento ingerido influenciou na sobrevivência das fêmeas de Ae. albopictus.

OBJECTIVES: To study the longevity of Ae. albopictus populations in rural and urban areas in two different feeding conditions and to assess their physiological age and reproductive history. METHODS: Ae. albopictus larvae were collected in the Paraíba Valley, (urban area) and Ribeira Valley (rural area), São Paulo State, Brazil. In the laboratory, females were fed with sugar or blood and monitored daily. The day of death of each mosquito and other reproduction related characteristics were registered. Ovaries were dissected using Polovodova techniques and follicular development was examined according Christophers and Mer. Life tables were created and statistics analysis was performed for survival rates. Data analysis was carried out using Stata 7.0. RESULTS: Gonotrophic discordance was seen in both populations. Parous females developed terminal sacs. Nulliparous females had normal ovaries and in some cases dilatations were seen. Females fed with sugar showed higher survival rates. Statistical difference in survival rates was not observed in the populations of both areas. CONCLUSIONS: Parity status and physiological age of Ae. albopictus were not described using ovarioles analysis because they formed terminal sacs instead of dilations. Longevity of Ae. albopictus females was influenced by the food provided.

OBJETIVOS: Estudar a sobrevivência de populações de Aedes albopictus de ambientes rural e urbano, em diferentes condições de alimentação, e analisar sua idade fisiológica e a história reprodutiva. MÉTODOS: Foram coletadas larvas de Ae. albopictus no Vale do Paraíba (localidade urbana), e no Vale do Ribeira (localidade rural), Estado de São Paulo. As fêmeas que emergiram foram alimentadas com açúcar ou com sangue e observadas diariamente anotando a data da morte de cada uma e outras variáveis relacionadas com a reprodução. Os ovários foram dissecados seguindo a técnica de Polovodova, e a avaliação do desenvolvimento folicular segundo Christophers e Mer. Foram construídas tábuas de vida e analisadas estatísticamente as taxas de sobrevida. Para análise dos dados foi utilizado o Stata 7.0. RESULTADOS: Foi observada discordância gonotrófica nas duas populações de Ae. albopictus. As fêmeas oníparas desenvolveram sacos terminais. As nulíparas apresentaram ovários normais e em alguns casos foram observadas dilatações. As fêmeas alimentadas com açúcar apresentaram maiores taxas de sobrevida. Não foi detectada diferença estatística na taxa de sobrevida entre as duas populações avaliadas. CONCLUSÕES: A idade fisiológica e o estado de paridade de Ae. albopictus não foram definidas pela análise dos ovaríolos porque estes apresentaram sacos terminais em vez de dilatações. O tipo de alimento ingerido influenciou na sobrevivência das fêmeas de Ae. albopictus.

OBJECTIVES: To study the longevity of Ae. albopictus populations in rural and urban areas in two different feeding conditions and to assess their physiological age and reproductive history. METHODS: Ae. albopictus larvae were collected in the Paraíba Valley, (urban area) and Ribeira Valley (rural area), São Paulo State, Brazil. In the laboratory, females were fed with sugar or blood and monitored daily. The day of death of each mosquito and other reproduction related characteristics were registered. Ovaries were dissected using Polovodova techniques and follicular development was examined according Christophers and Mer. Life tables were created and statistics analysis was performed for survival rates. Data analysis was carried out using Stata 7.0. RESULTS: Gonotrophic discordance was seen in both populations. Parous females developed terminal sacs. Nulliparous females had normal ovaries and in some cases dilatations were seen. Females fed with sugar showed higher survival rates. Statistical difference in survival rates was not observed in the populations of both areas. CONCLUSIONS: Parity status and physiological age of Ae. albopictus were not described using ovarioles analysis because they formed terminal sacs instead of dilations. Longevity of Ae. albopictus females was influenced by the food provided.

OBJETIVO: Observar a potencialidade sinantrópica de Anopheles bellator e de An. cruzii em vilarejo rodeado por ambiente natural. MÉTODOS: As observações foram levadas a efeito na localidade de Pedrinhas, no Sudeste do Estado de São Paulo, Brasil, de outubro de 1996 a janeiro de 2000. A sinantropia, ou domiciliação, foi estimada pelo índice de Nuorteva (s) acrescido do fator intradomiciliar de Mihályi (d) e adaptado para culicídeos hematófagos. RESULTADOS: Utilizando procedimento baseado na atração pela isca humana, as duas espécies de Kerteszia mostraram freqüência conjunta positiva correspondente a s=35,7. Isso parece indicar a existência de certo grau de sinantropia por parte desses mosquitos. Assim também, a população de Cx. sacchettae, correspondente à razão de sinantropia sr=12,8, obtida pelo cálculo da relação entre os dados conseguidos na armadilha de Shannon. Quanto ao método de procura ativa pela aspiração ambiental, os resultados obtidos consistiram em valores negativos de s. Assim, corresponderam a -43,1 para An. bellator, -48,2 para An. cruzii e -3,0 para Cx. sacchettae. Tais cifras foram relacionadas ao valor positivo de s=+93,8 apresentado por Cx. quinquefasciatus e considerado como equivalente a +100,00. CONCLUSÕES: O observado em relação a domicílios isolados rurais repetiu-se em conjunto de casas formando vila, também de caráter rural, e circundada por ambiente primitivo. Ou seja, esses mosquitos adultos tendem a procurar o ambiente antrópico na busca de repasto sangüíneo. Uma vez tendo-o conseguido, voltam para o ambiente de onde saíram. Todavia, revelou-se alguma tendência adaptativa revelada pelo encontro de formas imaturas de An. bellator em recipientes artificiais. Quanto a Cx. sacchettae, a população local parece mostrar tendência para adaptação ao meio antrópico.

OBJECTIVE: To determine the synanthropic potential of Anopheles bellator and An. cruzii in a village close to a wild environment. For comparative purposes, Culex quinquefasciatus and Cx. sacchettae populations were also investigated. METHODS: From October 1996 to January 2000, vectors investigations were carried out in Pedrinhas village, Southeastern of S. Paulo State, Brazil, through systematic collections with human bait, air aspirations and Shannon traps. The synanthropic index was estimated using Nuorteva's indices plus the Mihályi's endophylic factor. RESULTS: Attraction principle was s=35.7 for both Kerteszia species at the peridomiciliary environment through human bait. Cx. sacchettae showed a sr ratio of 12.8 with a degree of synanthropy. However active search through the aspiration method yielded negative s values, such as -43.1 for An. bellator and -48.2 for An. cruzii. For Cx. sacchettae that value was -3.0. These values were calculated when +100.00 was given to Cx. quinquefasciatus, which showed the highest synanthropic habits, corresponding to s =+93.8. CONCLUSIONS: The present data allow to conclude that what was observed until now for isolated rural dwellings is valid for small villages at the same conditions. This means that female Kerteszia adults tend to be in anthropic environment for blood seeking. After that, they return to the surrounding natural environment of the village. Regarding Cx. Sacchettae, they seem to have an anthropic adaptation tendency.

OBJETIVO: Observar a potencialidade sinantrópica de Anopheles bellator e de An. cruzii em vilarejo rodeado por ambiente natural. MÉTODOS: As observações foram levadas a efeito na localidade de Pedrinhas, no Sudeste do Estado de São Paulo, Brasil, de outubro de 1996 a janeiro de 2000. A sinantropia, ou domiciliação, foi estimada pelo índice de Nuorteva (s) acrescido do fator intradomiciliar de Mihályi (d) e adaptado para culicídeos hematófagos. RESULTADOS: Utilizando procedimento baseado na atração pela isca humana, as duas espécies de Kerteszia mostraram freqüência conjunta positiva correspondente a s=35,7. Isso parece indicar a existência de certo grau de sinantropia por parte desses mosquitos. Assim também, a população de Cx. sacchettae, correspondente à razão de sinantropia sr=12,8, obtida pelo cálculo da relação entre os dados conseguidos na armadilha de Shannon. Quanto ao método de procura ativa pela aspiração ambiental, os resultados obtidos consistiram em valores negativos de s. Assim, corresponderam a -43,1 para An. bellator, -48,2 para An. cruzii e -3,0 para Cx. sacchettae. Tais cifras foram relacionadas ao valor positivo de s=+93,8 apresentado por Cx. quinquefasciatus e considerado como equivalente a +100,00. CONCLUSÕES: O observado em relação a domicílios isolados rurais repetiu-se em conjunto de casas formando vila, também de caráter rural, e circundada por ambiente primitivo. Ou seja, esses mosquitos adultos tendem a procurar o ambiente antrópico na busca de repasto sangüíneo. Uma vez tendo-o conseguido, voltam para o ambiente de onde saíram. Todavia, revelou-se alguma tendência adaptativa revelada pelo encontro de formas imaturas de An. bellator em recipientes artificiais. Quanto a Cx. sacchettae, a população local parece mostrar tendência para adaptação ao meio antrópico.

OBJECTIVE: To determine the synanthropic potential of Anopheles bellator and An. cruzii in a village close to a wild environment. For comparative purposes, Culex quinquefasciatus and Cx. sacchettae populations were also investigated. METHODS: From October 1996 to January 2000, vectors investigations were carried out in Pedrinhas village, Southeastern of S. Paulo State, Brazil, through systematic collections with human bait, air aspirations and Shannon traps. The synanthropic index was estimated using Nuorteva's indices plus the Mihályi's endophylic factor. RESULTS: Attraction principle was s=35.7 for both Kerteszia species at the peridomiciliary environment through human bait. Cx. sacchettae showed a sr ratio of 12.8 with a degree of synanthropy. However active search through the aspiration method yielded negative s values, such as -43.1 for An. bellator and -48.2 for An. cruzii. For Cx. sacchettae that value was -3.0. These values were calculated when +100.00 was given to Cx. quinquefasciatus, which showed the highest synanthropic habits, corresponding to s =+93.8. CONCLUSIONS: The present data allow to conclude that what was observed until now for isolated rural dwellings is valid for small villages at the same conditions. This means that female Kerteszia adults tend to be in anthropic environment for blood seeking. After that, they return to the surrounding natural environment of the village. Regarding Cx. Sacchettae, they seem to have an anthropic adaptation tendency.

OBJETIVO: No período de 1996 a 1999, um agente viral causador de encefalomielite afetou as populações de eqüinos em diferentes regiões do Estado do Paraná, Brasil. Objetivou-se realizar pesquisa sorológica na tentativa de isolar o vírus causador da doença. MÉTODOS: Em quatro municípios do Estado do Paraná, Brasil, foram coletados culicídeos com armadilha Shannon e isca humana, identificados e processados para isolamento de vírus. Em dois municípios estudados foram colhidas amostras de sangue de eqüinos para isolamento de vírus e para pesquisa sorológica. Os soros foram analisados pelo teste de inibição da hemaglutinação frente a diferentes antígenos de Alphavirus e Flavivirus. Aqueles que revelaram reações positivas-cruzadas foram analisados pelo teste de neutralização. RESULTADOS: Foram coletados culicídeos dos gêneros: Culex, Aedes, Mansonia, Coquillettidia, Psorophora, Sabethes, Wyeomyia e Limatus. Embora não sendo isolado o agente viral, foram detectados anticorpos hemaglutinantes para os vírus Encefalomielite eqüina do Leste, Mucambo, Pixuna, Maguari e St. Luis. Em doze amostras de soros foram detectados anticorpos neutralizantes para os vírus Encefalomielite eqüina do Leste. CONCLUSÕES: Foram coletadas espécies de culicídeos, considerados na bibliografia como vetores de vírus causadores de encefaliomielite buniavírus e outras arboviroses de importância epidemiológica. Pela presença de sintomas de encefalomielite e de anticorpos para o vírus Encefalomielite eqüina do Leste nos soros dos cavalos, supõe-se ser esse o vírus causador da doença nos eqüinos das regiões estudadas.

INTRODUCTION: In the period of 1996-1999 some virus associated with encephalitis have been reported in horses from different regions of Paraná State, Brazil. To identify the etiologic agent associated with this illness, mosquitoes and serum samples were collected in the endemic area. METHODS: The study area corresponded to four municipalities of Paraná State, Brazil. Mosquitoes were captured in Shannon trap and human bait. After identification, they were processed for virus isolation. Blood of equines were collected in the municipalities of Querência do Norte and Colorado. Antibodies to different Alphavirus and Flavivirus were analyzed by hemagglutination inhibition test. Specific seroneutralization reactions were performed in those sera with a positive reaction in the hemagglutination test. RESULTS: The mosquitoes genus collected were: Culex, Aedes, Mansonia, Coquillettidia, Psorophora, Sabethes, Wyeomyia, and Limatus . Even thought no virus was isolated, serologic analyses showed hemagglutinazing antibodies to Eastern equine encephalitis, Mucambo, Pixuna, Maguari, and St Luis encephalitis viruses. The neutralization test showed specific reaction to Eastern equine encephalitis virus in 12 tested sera. CONCLUSIONS: Species of mosquitoes that could be potential vectors of encephalitis, buniavirus, and other arboviruses of epidemiological importance were collected. It is believed that Eastern equine encephalitis virus affected the equines populations in the study regions because of the symptoms and antibodies for the virus in the sera detected in these equines.

OBJETIVO: No período de 1996 a 1999, um agente viral causador de encefalomielite afetou as populações de eqüinos em diferentes regiões do Estado do Paraná, Brasil. Objetivou-se realizar pesquisa sorológica na tentativa de isolar o vírus causador da doença. MÉTODOS: Em quatro municípios do Estado do Paraná, Brasil, foram coletados culicídeos com armadilha Shannon e isca humana, identificados e processados para isolamento de vírus. Em dois municípios estudados foram colhidas amostras de sangue de eqüinos para isolamento de vírus e para pesquisa sorológica. Os soros foram analisados pelo teste de inibição da hemaglutinação frente a diferentes antígenos de Alphavirus e Flavivirus. Aqueles que revelaram reações positivas-cruzadas foram analisados pelo teste de neutralização. RESULTADOS: Foram coletados culicídeos dos gêneros: Culex, Aedes, Mansonia, Coquillettidia, Psorophora, Sabethes, Wyeomyia e Limatus. Embora não sendo isolado o agente viral, foram detectados anticorpos hemaglutinantes para os vírus Encefalomielite eqüina do Leste, Mucambo, Pixuna, Maguari e St. Luis. Em doze amostras de soros foram detectados anticorpos neutralizantes para os vírus Encefalomielite eqüina do Leste. CONCLUSÕES: Foram coletadas espécies de culicídeos, considerados na bibliografia como vetores de vírus causadores de encefaliomielite buniavírus e outras arboviroses de importância epidemiológica. Pela presença de sintomas de encefalomielite e de anticorpos para o vírus Encefalomielite eqüina do Leste nos soros dos cavalos, supõe-se ser esse o vírus causador da doença nos eqüinos das regiões estudadas.

INTRODUCTION: In the period of 1996-1999 some virus associated with encephalitis have been reported in horses from different regions of Paraná State, Brazil. To identify the etiologic agent associated with this illness, mosquitoes and serum samples were collected in the endemic area. METHODS: The study area corresponded to four municipalities of Paraná State, Brazil. Mosquitoes were captured in Shannon trap and human bait. After identification, they were processed for virus isolation. Blood of equines were collected in the municipalities of Querência do Norte and Colorado. Antibodies to different Alphavirus and Flavivirus were analyzed by hemagglutination inhibition test. Specific seroneutralization reactions were performed in those sera with a positive reaction in the hemagglutination test. RESULTS: The mosquitoes genus collected were: Culex, Aedes, Mansonia, Coquillettidia, Psorophora, Sabethes, Wyeomyia, and Limatus . Even thought no virus was isolated, serologic analyses showed hemagglutinazing antibodies to Eastern equine encephalitis, Mucambo, Pixuna, Maguari, and St Luis encephalitis viruses. The neutralization test showed specific reaction to Eastern equine encephalitis virus in 12 tested sera. CONCLUSIONS: Species of mosquitoes that could be potential vectors of encephalitis, buniavirus, and other arboviruses of epidemiological importance were collected. It is believed that Eastern equine encephalitis virus affected the equines populations in the study regions because of the symptoms and antibodies for the virus in the sera detected in these equines.